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Detección de flavivirus mediante RT-PCR en tiempo real en mosquitos de Mar del Plata

Presentado en el I Congreso Internacional de Zoonosis y Enfermedades Emergentes y VII Congreso Argentino de Zoonosis. 8 al 10 de junio de 2011, Buenos Aires, Argentina.

AUTORES  

S. Quintana¹, M.S. Estévez², L.M. Díaz Nieto³, M.E. Vidal Domínguez³, C. Berón³, M.A. Perotti⁴ 

1. Dra. Silvina Quintana. División Biología Molecular. Fares Taie Instituto de Analisis - biologiamolecular@farestaie.com.ar - Rivadavia 3331, (7600) Mar del Plata, 223-4753855 (Int.133), Buenos Aires, Argentina.

2. Dra. Susana Estévez. División Análisis Clínicos, sector Virología. Fares Taie Instituto de Análisis.  virologia@farestaie.com.ar - Rivadavia 3331, (7600) Mar del Plata, 223-4753855 (Int.133), Buenos Aires, Argentina.

3. Lic. L.M. Díaz Nieto, Lic. M.E. Vidal Domínguez, Dra. M.A. Perotti, Dra. C. Berón. Centro de Estudios de Biodiversidad y Biotecnología - CEBB - FIBA - Mar del Plata – CONICET. cberon@fiba.org.ar - Vieytes 3103(7600) Mar del Plata. Argentina.  

4. Dr. M.A. Perotti. School of Biological Sciences, University of Reading, Whiteknights Campus, Reading, RG6 6AS, U.K. 

 

RESUMEN 

Entre los artrópodos hematófagos, los mosquitos son sin duda insectos vectores de gran importancia en la salud humana y animal, ya que transmiten una gran variedad de arbovirus de diversos grupos. En el mundo se han aislado aproximadamente 500 tipos diferentes de estos virus, de los cuales, hasta el momento, 24 fueron detectados en Argentina. Entre ellos, el género flavivirus comprende arbovirus de gran importancia desde el punto de vista sanitario, ya que son responsables de numerosas enfermedades humanas, entre ellas las encefalitis de San Luís y del Nilo Occidental, la Fiebre Amarilla y el Dengue. El diagnóstico etiológico de las infecciones por arbovirus requiere del aislamiento del virus, la detección de anticuerpos específicos o la determinación del genoma viral por medio de metodologías de biología molecular. Con el objetivo de poder detectar arbovirus de importancia sanitaria de una manera altamente sensible, rápida, con bajo riesgo de contaminación de las muestras y menor cantidad de falsos positivos, en este trabajo se desarrolló una metodología para la detección de flavivirus en potenciales vectores de enfermedades humanas y animales mediante el uso de la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCRq). Para ello, se realizó un muestreo de larvas y adultos de mosquitos en criaderos de Mar del Plata y alrededores, a partir de los cuales se realizó la extracción de ARN total de homogenatos de mosquitos, su digestión con desoxirribonucleasa I (ADNasa I), retrotranscripción (RT) y amplificación por PCR en tiempo real. Como control interno de la técnica se utilizó la amplificación del gen correspondiente a la subunidad ribosomal 18S de mosquitos. Este control permite evaluar la calidad de la extracción del ARN. A partir del ADN copia se realizó la determinación de flavivirus por medio de PCRq utilizando oligonucleótidos genéricos. Como resultado de este trabajo fueron detectadas muestras positivas dentro del área de estudio. La utilización de esta técnica permitió detectar en forma rápida y eficiente la presencia de flavivirus en muestras de mosquitos.

 

Financiado por ANPCyT (PICT-2007-02069) y Universidad Nacional de Mar del Plata Proyecto (15E/329 EXA 382/07). 

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